Tapimas „Schizophyllum Commune“: sukurkite sterilią kultūrą iš rastų grybų: 3 žingsniai (su nuotraukomis)

2024 Autorius: John Day | [email protected]. Paskutinį kartą keistas: 2024-01-30 10:48

Ši pamoka skirta paaiškinti, kaip sukurti sterilią Schizophyllum Commune grybų kultūrą (bendras pavadinimas Split Gill grybas) ant Petri lėkštelės, naudojant rastus grybus. Nustatyta, kad Schizophyllum Commune turi daugiau nei 28 000 lyčių, ji randama visuose žemynuose, išskyrus Antarktidą, ir turi savybę (kaip ir kiti „baltojo ir rudojo puvinio grybeliai“) sumažinti endokrininę sistemą ardančią taršą (plastiką, hormonus imituojančius pramoninius naftos chemijos produktus, pvz. trąšos Atrazine, plastifikatorius bisfenolis-A arba sintetinis hormonas Diethylstilbestrol).

Apžvelgsiu laukinių grybų identifikavimo metodus, kaip pasigaminti maistinį agaro Petri lėkštelę ir kaip panaudoti rastus grybus, kad jūsų Petri lėkštelėje augtų sterili izoliuota kultūra. Kiti šios serijos nurodymai apima tokius metodus kaip genetinis grybų identifikavimas, paprasti fermentiniai tyrimai, skirti patikrinti grybų gebėjimą suskaidyti plastiką ir užteršti hormonus, ir kaip gaminti sūrį naudojant „S. Commune“.

Šis projektas buvo sukurtas bendradarbiaujant Mary Maggic, Paula Pin ir man rezidencijos metu HANGAR Barselonoje, Ispanijoje 2018 m. Rugsėjo mėn. 1 už pamoką:)

Vaizdai yra iš „Schizophyllum Commune Fanzine“~ failus galite nemokamai atsisiųsti čia

Rezidencijos metu trys pagrindiniai mūsų tikslai buvo:

1 ~ Tyrinėkite ir suvirškinkite mokslinę literatūrą apie Schizophyllum Commune ir jos įvairias sąveikas su hormonais ir endokrininę sistemą ardančiais naftos chemijos teršalais. S. Commune yra vienas iš daugelio „baltojo ir rudojo puvinio“grybų, galinčių suskaidyti hormoninę ir endokrininę sistemą ardančią taršą. Šie grybai maitinasi iš medžių išskirdami „lignoceliuliozinius“fermentus iš jų sujungtų kūnų arba „grybienos“, o fermentai gali suskaidyti celiuliozę ir ligniną, iš kurių pagaminti medžiai. Dėl struktūrinių panašumų tarp celiuliozės, lignino ir EDS / hormonų, tokių kaip Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol ir Nonylphenols, grybelių išskiriami „lignoceliuliozės“fermentai taip pat gali suskaidyti įvairius toksinus. Be to, S. Commune gamina imunostimuliuojančius polisacharidus, kurie yra naudingi kaip vėžio prevencija ir gydymas (Japonijoje patvirtintas gimdos kaklelio vėžiui gydyti), fermentacijos būdu gali pagerinti kai kurių augalų fitoestrogenines savybes, gali būti naudojamas vietoj fermento ir lactobacilius. sūrio gamybos procesus ir gaminti trombino krešulį tirpdančius fermentus (naudingus gydant trombozę). Keista, bet tuos pačius „beta-gliukanus“, kuriuos galima išgauti verdančiu vandeniu kaip vėžio gydymą ir imunostimuliatorius, taip pat naudoja naftos pramonė, siekdama padidinti naftos išeigą, pririšdama S. Commune į keistą grįžtamojo ryšio ciklą prie endokrininę sistemą ardančių medžiagų gamybos. naftos chemijos produktus, jis gali suskaidyti ir ištaisyti.

2 ~ Sukurkite „pasidaryk pats“ir „DIWO“(daryk tai su kitais) protokolus, supaprastinančius šiuos gavėjus, kad jie galėtų dirbti su EDC ir grybais, kad išverstų kodifikuotas mokslo žinias į labiau prieinamą kalbą. Naudokite šiuos receptus švietimui, klausimams, atsparumui molekulinėms kolonizacijoms ir naujų pasakojimų apie daugialypių rūšių atsiradimą ir mūsų kolektyvinę mutagenezę kūrimui.

3 ~ Iššūkis vyraujančiam cisheteronormatyviam, keistofobiniam diskursui apie endokrininę sistemą ardančias chemines medžiagas (EDC). Cituojant Malino Ah-Kingo ir Evos Hayward stipendiją šiais klausimais: "Daugelis naujienų agentūrų praneša apie šias bauginančias endokrinines pasakas iš mūsų kiemo. Siekdamos išryškinti šias problemas-kaip aprašysime toliau esančioje žiniasklaidoje, atskleidė Frankenšteino metamorfozę. tai kelia grėsmę seksui ir seksualumui. Užuot sprendžiant daugelį kitų pavojų sveikatai, susijusių su toksiniu poveikiu, sensacingiausi ir polemiškiausi klausimai kelia diskusijas ir kritinį atsaką. Tai kelia klausimų: kodėl seksas yra svarbesnis už vėžį, autoimuninė liga, ir net mirtis? Kokie kultūriniai nervai (daugelis jų yra globalizuoti) suaktyvinami? O kaip mums, turintiems feministinių rūpesčių, perorientuoti diskusijas nuo esencializmo, seksizmo ir heteronormatyvumo? " (Toksiškos lyties).

Schizophyllum Commune yra unikalus „baltojo puvinio grybas“, nes buvo nustatyta, kad jame yra daugiau nei 28 000 genetinių lyčių. Šis prisitaikymas, apie kurį daugelis teori, leidžia pasiekti neįtikėtiną šios rūšies genetinę įvairovę, egzistuojančią visuose pasaulio žemynuose, išskyrus Antarktidą. Norėjome švęsti gražią šio organizmo seksualinę įvairovę kaip vieną biologijos keistumo pavyzdį. Žiniasklaidoje ir net aplinkosaugos aktyvistų dominuojantis EDC diskursas daugiausia dėmesio skiria nemoksliniams pasakojimams, kad šios molekulės sukelia tam tikrą seksualumą ar lytį, kurią mūsų visuomenė patologizuoja, žymi nenormines ir dažnai siekia jos pašalinti arba išvengti. Visuomenės pasipiktinimas dėl EDC moksliškai nerealių priežasčių yra ne tik seksualinės panikos, keistos fobiškos visuomenės dėmesys (hormonai ir endokrininę sistemą ardantys veiksniai nekelia žmonių keistuolių ar transų), bet ir ignoruojamas visas pražūtingai tikras poveikis, kurį galime susieti su EDC: nutukimas, skydliaukės sutrikimai, tam tikri vėžio atvejai, be kitų pavojų sveikatai.

1 žingsnis: raskite „Schizophyllum Commune“, gyvenančią jūsų bendruomenėje

Laboratorines sterilias Schizophyllum Commune kultūras galima įsigyti už maždaug 350 USD iš mikrobiologinių kultūrų banko, pvz., ATCC … todėl mes pasirinkome nemokamai auginti laukinius grybus:)

Man buvo lengva, nes skaičiau apie Schizophyllum Commune ir tik vieną dieną pastebėjau, kad ji auga ant medžio priešais mano butą. Jei jums nepasisekė netyčia užklupti jūsų kaimynystėje esančią S. Commune, norėsite nuvykti į miškingą vietovę ieškoti „kronšteino“grybų, augančių ant sergančių kietmedžio medžių (medžių, kurie atrodo kaip nedarantys) per gerai) arba nukritę medžiai. S. Commune yra vienas iš labiausiai paplitusių grybų visame pasaulyje ir jį galima rasti beveik visur, kur yra kietmedžio.

Mushroomobserver.org pateikia išsamų aprašymą, kur ir kada greičiausiai rasite S. Commune, taip pat kaip jį atpažinti ir kaip išvengti „panašios išvaizdos“, galinčios sukelti klaidingą tapatybę:

IDENTIFIKAVIMAS: Schizophyllum komuną nesunku atpažinti pagal suskaldytas žiaunas, tankius plaukus ir vėduoklės formos dangtelį. Kepurėlė yra 1-4,5 cm pločio ir paprastai yra apvalkalo arba vėduoklės formos su pilku arba balkšvu paviršiumi. Basidiosporos yra 5-7,5 × 2 -3 mikrometrai. Panašus grybas, žinomas kaip „Crimped Gill“Plicaturopsis crispa, nėra taip plačiai paplitęs.

ĮMONĖ: Schizophyllum commune auga ant kietmedžio, naudojant fermentus, kad suskaidytų ligniną ir sukeltų „baltąjį puvinį“. Taigi jis randamas daugelyje medinių vietovių. Jį galima rasti ištisus metus, nes jis gali išdžiūti, rehidratuoti geresnėmis sąlygomis ir toliau sporuliuoti.

Šis grybas gali būti parazitinis ant mažo skersmens medžių, kuriuos veikia kiti veiksniai, pvz., Sausra.

ŽIŪRĖKITE: Plicaturopsis crispa arba „gofruotos žiaunos“yra panašios į „Split Gill“. Jis taip pat turi lukšto/vėduoklės formos vaisių kūną. Tačiau dangtelis yra rausvai rudos arba geltonai rudos spalvos, o apatinė dalis yra labai savita. Ji turi gofruotą gyslelę, panašią į žiaunas, kuri yra daug kitokia nei skaldytos Schizophyllum komunos žiaunos. Gofruotos žiaunos yra mažiau paplitusios, tačiau suradusios jos išsiskiria “.

2 žingsnis: padarykite maistinių agaro plokščių, kad S. Commune augtų

Jei norite išskirti rastas „S. Commune“kultūrą, jums reikės kai kurių „Petri“patiekalų, užpildytų maistu grybams. Salyklo ekstraktas agaras yra paprastas „S. Commune“maistas arba „maistinė terpė“, kurią galima pagaminti iš lengvai prieinamų ingredientų. Tai taip pat yra geras maisto šaltinis, kurį galima naudoti atliekant fermentinio tyrimo eksperimentus su S. Commune ir kitais baltojo ar rudojo puvinio grybais. ~~ Šis procesas bus aprašytas kitoje instrukcijoje.

ŠALUTINĖ PASTABA: Jei jums kilo sunkumų ieškant S. Commune, toje pačioje šeimoje yra daug kitų grybų, kuriuos galima auginti naudojant tuos pačius procesus ir jie yra tokie pat geri, jei ne geresni, ardydami endokrininę sistemą ardančius teršalus. Turkijos uodega (Trametes Versicolor) buvo nustatyta daugelyje tyrimų, kurių metu šimtai baltojo ir rudojo puvinio grybelių buvo didžiausi „lignoceliuliozinių“fermentų, kurie mažina naftos chemijos taršą, gamintojai. Taip pat labai tinka austrių grybai.

Aš dirbu savo mikrobiologinį darbą bendruomenės biologijos laboratorijoje, pavadintoje BUGSS (Baltimorės požeminė mokslo erdvė), kur turiu prieigą prie stiklo indų, skaitmeninių svarstyklių, graduotų cilindrų, autoklavo (terpės sterilizavimui karščiu ir slėgiu) ir pan. atsirado visame pasaulyje per pastarąjį dešimtmetį, todėl galbūt norėsite patikrinti šį sąrašą, kad pamatytumėte, ar šalia jūsų yra. Jei jūsų rajone nėra tokios puikios bendruomenės laboratorijos, turėsite investuoti į tam tikrą pagrindinę šio proceso įrangą, pavyzdžiui:

1 ~ Skaitmeninė skalė, skirta tiksliai išmatuoti ingredientus

2 ~ Slėginė viryklė, skirta jūsų terpei sterilizuoti karščiu ir garais

3 ~ „Petri“lėkštes, internetu galima nusipirkti gana pigiai, daugkartinio naudojimo stiklas ar vienkartinis plastikas tiks, bet pakartotinai naudoti visada yra geriau:)

4 ~ Kai kurie stikliniai indai, skirti ingredientams sumaišyti, sterilizuoti ir laikyti.

Jei nenorite investuoti į šią įrangą, galite rasti iš anksto supilto salyklo ekstrakto agaro plokščių, kurias galite nusipirkti tokiose svetainėse kaip „Amazon“-ilgainiui tiesiog bus brangiau, jei planuojate tęsti mikrobiologinį darbą.

Jau yra daug puikių vadovų ir „YouTube“vaizdo įrašų, kaip namuose pasigaminti maistinių medžiagų Petri patiekalų. Taigi, užuot išsamiai išnagrinėjęs šį klausimą, aš tiesiog susiesiu porą ir pateiksiu 2% salyklo ekstrakto agaro, kuris yra jūsų naudojama maistinė terpė, receptą.

„Freshcap“grybai: vadovas, kaip pasigaminti agaro plokščių grybams auginti namuose

Mykoweb: Darbo su grybais pradžia

Salyklo ekstrakto agaro techninių duomenų lapas

2% salyklo ekstrakto agaras (MEA) ~ ~ 1 litro receptas:

20 g salyklo ekstrakto (įprasto alaus gaminimo reikmenų, galima įsigyti internetu)

15 g agaro (kietinantis agentas - jis dažnai naudojamas gaminant maistą, todėl jį galima įsigyti internetu arba kai kuriose maisto prekių parduotuvėse)

1 litras H20 (dažniausiai naudoju atvirkštinio osmoso vandenį, kurį galima įsigyti daugumoje bakalėjos parduotuvių galonų ąsočiuose)

Šį receptą galima lengvai pakeisti, jei norite gaminti mažesnius kiekius. Pavyzdžiui, dažnai vienu metu gaminu tik 250 ml, todėl galiausiai naudoju tik 5 gramus salyklo ekstrakto, 3,75 gramo agaro ir 250 ml vandens.

3 žingsnis: inokuliuokite „Petri“patiekalą grybais

Grybas, kurį matote, vadinamas „vaisiaus kūnu“, tai tik maža organizmo dalis. Didžioji jo kūno dalis yra paslėpta medyje (arba žemėje), sunaudojant medieną. Ši grybų dalis vadinama grybiena. Norėdami kultivuoti Schizophyllum Commune baltą gijinį, čiuptuvinį, šakniastiebinį, micelinį kūną ant Petri lėkštelės, paimsite stiebo mėginį, sterilizuosite ir padėsite ant MEA plokštelių. Grybiena išaugs iš sterilizuoto grybų stiebo šerdies mėginio ir kolonizuos Petri lėkštelę, atrodančią kaip baltas medvilninis kilimėlis.

Jums reikės:

• Salyklo ekstrakto agaro (MEA) plokštelės, kurias paruošėte ankstesniame žingsnyje
• 70% izopropilo alkoholio (trynimo alkoholio) ir purškimo buteliuko
• Popieriniai rankšluosčiai
• Skalpelis, arba tiesiog nerūdijančio plieno skustuvas - dėžutės pjaustytuvas tiks
• metaliniai pincetai
• pirštines
• Liepsna - instrumentų sterilizavimui naudoju „Alcohaul“lempą, „NonDisjunction“turi puikią pamoką, kaip ją pasigaminti čia.
• Sterilus paviršius, kurį reikia pjaustyti (aš tam tiesiog naudoju sterilų Petri lėkštę)
• „Parafilm“, parafino plėvelė, naudojama Petri lėkštelėms sandarinti - taip pat galite naudoti maskavimo juostą, jei jos neturite

STERILINĖ TECHNIKA:

Pagrindinis dalykas, kurį norite turėti omenyje bandydami naudoti sterilią techniką, yra tai, kad bakterijos ir sporos nuolat krinta ore, todėl norite, kad jūsų Petri lėkštelės būtų kuo labiau uždengtos. Kai pakeliate dangtelius, kad supiltumėte terpę, ar skiepytumėte, visada geriausia laikyti dangtelį tiesiai virš indo, kad galėtumėte pasiekti vidų horizontaliai, bet dangtelį laikyti virš indo, kad bakterijos nepatektų. Antra, yra milžiniškas žmonių, bakterijų, grybelių ir kitų organizmų konglomeratas, nors jūs to nematote, tačiau jus supa tankus mikrobų debesis, išsisklaidantis iš jūsų kūno. Vietoj to, kad sėdėtumėte ant odos paviršiaus, jūsų mikrobiomas išsikiša į orą ~ ~ sooooooo, niekada nemostuokite rankomis virš Petri lėkštelės ir nesilenkite virš atviro indo, kad pažiūrėtumėte. Ir mūvėkite pirštines tu juos turi;)

NUSTATYKITE PUSIOS STERILIJOS DARBO VIETĄ

Pasirinkite neporingą darbo paviršių, kuriame nėra šiukšlių ir šiukšlių. Purškite vietą 70% izopropilo alkoholio tirpalu ir nuvalykite popieriniu rankšluosčiu. Padėkite liepsną darbo zonos centre ir uždekite. Norėsite dirbti kuo arčiau liepsnos, nes aplink ją susidaro mažas sterilus laukas. Padėkite MEA plokštes į vieną pusę, o grybų mėginį - ant sterilaus pjovimo paviršiaus kitoje pusėje. Aš paprastai naudoju sterilų Petri lėkštę kaip sterilų pjovimo paviršių, taip pat kaip įrankio atramą. Į mažą stiklinę supilkite šiek tiek izopropilo alkoholio - juo dirbdami sterilizuosite ašmenis ir pincetus.

*¡~ INOCULATE ~!*

Prieš ką nors darydami, sterilizuokite ašmenis ir pincetus, panardindami juos į izopropilo alchą ir šiek tiek laikydami virš liepsnos. Po sterilizavimo padėkite juos ant sterilaus pjovimo paviršiaus, jei juos padėjote. Pincetu nejudindami laikykite grybų stiebą ir nupjaukite gabalėlį. Paimkite šį gabalėlį ir supjaustykite visas šonus taip, kad gautumėte nedidelį grybų stiebo šerdies kubelį su visais išoriniais paviršiais. Tai padeda atsikratyti visų kitų grybų mikrobų, kad jie neužterštų jūsų kultūros. Tada panardinkite stiebo šerdį į izopropilą maždaug 30 sekundžių, ištraukite ir leiskite išdžiūti steriliame liepsnos lauke (nenaudokite liepsnos jam džiovinti, tai nužudys grybą). Laukdami, kol stiebo šerdis išdžius, dar kartą sterilizuokite liepsną. Tada tiesiog pakelkite vienos iš savo MEA plokštelių dangtelį tiek, kad pincetas išstumtų iš šono, ir naudokite sterilizuotus pincetus, kad koto šerdis būtų plokštelės centre. Uždenkite plokštelę parafilmu ir per ateinančias kelias savaites turėtumėte pamatyti S. Commune grybieną, kolonizuojančią plokštelę.

Dirbdamas su laukiniais mėginiais, dažniausiai gaminu kelias lėkštes, kad jei užsikrėčiau, labiau tikėtina, kad turėsiu bent vieną švarią kultūrą.